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在分子实验室中减少污染的10种方法

日期:2018-08-02 16:15:00发布人:本站浏览数:4345

 在这里,我们讨论了控制或最小化分子实验室污染的十种方法。

  1.实验室建设

  预防污染始于PCR实验室的建设或建立。至少应指定两个区域进行PCR检测:PCR前和PCR后。应指定一个房间或区域专门用于预PCR。最理想的是,这个房间应该进一步分为两个区域,PCR主混合物制备和样品制备/主混合物的添加。

  通过使用具有UV光的死气箱(DAB),可以将主混合物制备与样品添加分开。DAB拥有主混合物制备所需的消耗品和专用小型设备(小型离心机,涡流管,移液器,吸头和管)。

  样品制备可涉及手动或自动提取。样品制备所需的消耗品和小型设备(小型离心机,涡流管,移液器,吸头和管等)可以放在台式,另一个DAB或生物安全柜(BSC)中,具体取决于您正在使用的样品。该区域还可用于将样品添加到PCR主混合物中。

  应该有一个专用的冰箱/冰柜用于存放工具包,另一个用于存放样品。

  应建立第二个房间(PCR后)用于扩增后步骤和分析。这个房间应该与PCR前房间分开。PCR后室是用于扩增的热循环仪和PCR后分析所需的任何仪器的位置。理想情况下,DAB将用于该区域,用于在PCR扩增后需要操作开放管的任何步骤。DAB应容纳PCR后制备所需的消耗品和小型设备(小型离心机,涡流泵,移液器,吸头和管)。

  2.环境控制

  这两个区域(预PCR和后PCR)应该具有独立的环境控制,而不是使用常见的管道系统进行空调。此外,两个房间都应配备气锁门。注意:如果无法为PCR前和PCR后工作建立物理屏障或单独的房间,应尽一切努力将工作区域尽可能远地设置。实验室技术人员应将这两个工作区视为处于不同的房间。应注意在每个区域佩戴不同的个人防护装备(PPE)。

  3.单向工作流程

  分子实验室的工作流程应仅在一个方向上继续,即Pre-PCR> PCR后。PCR主混合试剂和可能含有PCR模板的样品应仅在PCR前室制备。

  在PCR后室中经历扩增的管含有扩增子(扩增的模板),并且在任何情况下都不应该在PCR前室中打开或引入。扩增子可以作为未来PCR反应的模板,因此很容易污染PCR或样品制备试剂,消耗品或设备。

  这意味着,在未经彻底净化的情况下,引入PCR后室的消耗品和PPE(实验室外套,手套,护目镜等)不应放回PCR前室。

  当从一个房间移动到另一个房间时,实验室技术人员必须记住改变PPE。理想情况下,在PCR后工作的技术人员不应该回到Pre-PCR中工作。如果必须违背单向工作流程,则应注意更改PPE。


  4.专用耗材和设备

  我们可以最大限度地减少PCR实验室污染的另一种方法是使用专用于每个房间的消耗品和设备。每个房间和/或工作区域应该有自己的离心机,涡旋器,移液器,手套,外套等。例如,永远不要“借用”PCR后移液器用于预PCR室,而不首先彻底净化移液器。

  5.使用耐气溶胶移液器

  移液样品时,即使是经验最丰富的技术人员也可以在没有适当的移液技术和移液器吸头的情况下制造气溶胶。气溶胶可导致样品间的交叉污染。防气溶胶移液管尖端具有屏障,当暴露于潜在的液体污染物时,该屏障用作密封,将它们捕获在屏障内。这可以保护移液器免受任何液体污染。

  6.移液技术

  在任何分子检测中,适当的移液技术对结果的性能和质量至关重要。此外,正确的移液技术可以最大限度地减少样品之间的污染,从而导致假阳性结果。适当的移液技术可确保吸取和分配准确的体积,并在分配液体时避免飞溅。小心打开和关闭所有样品管和反应板,使样品不会溅出。打开管之前旋转管/板可以在打开管时防止气溶胶。还要记住,尽可能始终保持反应和组件的上限。防止交叉污染的最有效方法之一是使用良好的移液技术。

 7.经常换手套

  在PCR区域工作时,实验室技术人员应始终戴上新手套。经常更换手套,特别是如果您怀疑他们已经被含有模板DNA的溶液弄脏了。

  8.无菌清洁技术

  在PCR工作之前和之后应定期进行适当的无菌清洁。这适用于所有工作表面,包括台面,移液器,冰箱/冷冻手柄和任何其他接触点。我们建议每天使用10-15%(0.5-1%次氯酸钠)漂白剂擦拭并浸泡这些表面。2十五分钟后,使用DI水沾湿的纸巾清除漂白剂残留物。然后用70%酒精湿润的纸巾帮助快速干燥表面。此外,在使用至少10分钟后,在新鲜的10%漂白剂中浸泡使用架子,然后在一夜之间进行漂洗和风干可以防止进一步污染。

  9. 擦拭测试

  定期擦拭试验应作为标准程序实施,以便在污染成为问题之前主动监测实验室环境中的污染情况。至少应该每月进行一次擦拭测试。如果怀疑有任何污染,应增加此频率。

  10.积极率监测

  标准实践包括阳性对照以确保提取和扩增的适当性能以及试剂的功能。无模板对照(NTC)用于检查试剂,消耗品和环境中是否存在污染。除阳性和阴性对照外,实验室应建立监测阳性率的标准程序。应调查无法确定病因(即季节性爆发)的阳性标本突然增加。

  以上,是中南实验室建设为大家总结的十种方法,并提供了防止未来污染的技巧。通过努力遵循这些建议,您可以防止污染在您的实验室中成为问题。

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